La peptone et l'extrait de viande fournissent des acides aminés, de l'azote, du carbone, des minéraux et des vitamines pour la croissance des organismes. Le chlorure de sodium maintient l'équilibre osmotique du milieu. Le lactose est l'hydrate de carbone fermentable. Le bleu de bromothymol est l'indicateur de pH. L'agar est l'agent de solidification.
Alors que les fermenteurs de lactose produisent une acidification du milieu, les entérobactéries ne fermentant pas le lactose provoquent une alcalinisation du milieu en raison de la décomposition des peptones avec production d'ammoniaque.