L'hydrolysat acide de caséine et l'extrait de bœuf fournissent des acides aminés, de l'azote, des minéraux, des vitamines, du carbone et d'autres nutriments qui favorisent la croissance des micro-organismes. L'amidon agit comme un colloïde protecteur contre les molécules toxiques qui peuvent être présentes dans le milieu. L'hydrolyse de l'amidon pendant l'autoclavage fournit une petite quantité de glucose, qui est une source d'énergie. L'agar est l'agent solidifiant.
La méthode Kirby-Bauer est basée sur la diffusion, à travers la gélose, de la substance antimicrobienne qui imbibe le disque de papier. Chaque disque contient une concentration unique de l'agent antimicrobien qui inhibe la croissance du micro-organisme en formant un halo autour du disque. Le diamètre du halo inhibiteur est corrélé à la concentration minimale inhibitrice (CMI).
La gélose Mueller Hinton II est fabriquée pour contenir de faibles niveaux de thymine et de thymidine et des niveaux contrôlés d'ions calcium et magnésium.