Il est exempt d'autres sucres, d'amidon, de protéines et de métaux. Dans les milieux liquides, il est généralement utilisé à une concentration de 0,5 % ; des concentrations élevées sont utilisées pour la préparation de milieux solides.
Le glucose peut être utilisé comme ingrédient des milieux de culture déshydratés et doit être dissous dans de l'eau distillée ou désionisée et stérilisé de préférence par filtration.