Il est utilisé pour les milieux tels que Mac Conkey Agar, SS Agar et Violet Red Agar à une concentration de 0,15 % pour inhiber la croissance des organismes Gram-positifs et des bacilles sporulés sans affecter le développement des organismes Gramnegum.
Les sels biliaires N. 3 peuvent être utilisés en tant qu'ingrédient de milieux de culture déshydratés et doivent être dissous dans de l'eau distillée ou désionisée et stérilisés à l'autoclave.