Un disque de papier imprégné d'optochine est appliqué directement sur une plaque de gélose inoculée avant incubation. Les pneumocoques, qui sont sensibles à l'optochine, produisent une zone d'inhibition autour du disque, tandis que les autres streptocoques alpha-hémolytiques se développent jusqu'au bord du disque ou présentent une très petite zone d'inhibition.