Les disques sont appliqués à la surface d'un milieu de culture inoculé avec une suspension pure de colonies du micro-organisme examiné. Après incubation, les plaques sont examinées, les halos d'inhibition autour de chaque disque sont examinés et comparés aux halos d'inhibition standard : de cette façon, les micro-organismes sont définis comme étant sensibles, intermédiaires ou résistants aux agents antimicrobiens testés.