Un disque de papier imprégné de bacitracine est appliqué directement sur une plaque de gélose inoculée avant incubation.
Les Streptococcus pyogenes ou les streptocoques du groupe A (GAS), qui sont sensibles à la bacitracine, produisent une zone d'inhibition autour du disque, tandis que d'autres streptocoques bêta-hémolytiques se développent jusqu'à l'intérieur du disque.